Разработка методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного
Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) — лекарственное растение, широко используемое в традиционной медицине стран Европейского союза, Великобритании, Японии и в китайской медицине, является перспективным для применения в отечественной фармации. Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) и ревень тангутский (Rheum palmatum L.) — близкородственные виды растений, содержащие в составе две доминирующие группы биологически активных веществ: антраценпроизводные и дубильные вещества. Целью исследования было определение оптимальных условий экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного и разработка методики количественного анализа. Объектами исследования служили корни ревеня лекарственного (Rheum officinale B.). Электронные спектры измерялись на УФ-спектрофотометре UNICO 2800. Были изучены УФ-спектры растворов водных извлечений из сырья. В качестве стандарта использован катехин, дающий максимум поглощения при длине волны 282±2 нм. Оптимальные условия экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного: экстрагент — вода; соотношение сырья и экстрагента —1:50; время экстракции — 15 мин на кипящей водяной бане. Была разработана методика количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного методом спектрофотометрии в пересчете на катехин при аналитической длине волны 282±2 нм. Содержание дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного — 25,35%.
Ключевые слова: ревень тангутский, ревень лекарственный Rheum palmatum L., Rheum officinale B., корни, дубильные вещества, катехин, стандартизация, спектрофотометрия.
Для цитирования: Семенюта К.Н., Куркин В.А., Шмыгарева А.А., Саньков А.Н. Разработка методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного. РМЖ. Медицинское обозрение. 2020;28(11):79-80.
Development of assay methods for tannins content in Rheum officinale B.
K.N. Semenyuta, V.A. Kurkin, A.A. Shmygareva, A.N. Sankov
Orenburg State Medical University, Orenburg
Rheum officinale B. is a medicinal plant widely used in the traditional medicine of the European Union, United Kingdom, Japan and China and is promising for use in national pharmacy. Rheum officinale B. and Rheum palmatum L. are closely related plant species that contain two dominant groups of biologically active substances — anthracene derivatives and tannins. The aim of the study was to determine the optimal conditions for extracting tannins from the Rheum officinale B. and develop an assay technique. The study objects were the roots of Rheum officinale B. Electronic spectra were measured using Unico 2800 UV spectrophotometer. Solutions UV spectra of water extracts from raw materials were studied. Catechin was used as a reference standard, which had a maximum absorption at a wavelength of 282±2 nm. Optimal conditions for extracting tannins from the Rheum officinale B.: extraction solvent — water; raw material/extraction solvent ratio — 1:50; extraction time — 15 minutes in a boiling water bath. Assay method for tannins content in Rheum officinale B. by spectrophotometry on the basis of catechin at the analytical wavelength of 282±2 nm has been developed. The content of tannins in the Rheum officinale B. was 25.35%.
Keywords: Rheum palmatum L., Rheum officinale B., roots, tannins, catechin, standardization, spectrophotometry.
For citation: Semenyuta K.N., Kurkin V.A., Shmygareva A.A., Sankov A.N. Development of assay methods for tannins content in Rheum officinale B. RMJ. 2020;11:78–80.
Введение
Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) — лекарственное растение, широко используемое в традиционной медицине стран Европейского cоюза, Великобритании, Японии и в китайской медицине, является перспективным для применения в отечественной фармации. Ревень лекарственный (Rheum officinale B.) и ревень тангутский (Rheum palmatum L.) — близкородственные виды растений, содержащие в своем составе две доминирующие группы биологически активных веществ: антраценпроизводные и дубильные вещества [1–3]. Ревень в минимальных дозах оказывает вяжущее действие, а также уменьшает перистальтику кишечника [2]. Это объясняется действием гидролизуемых дубильных веществ (танин). Дубильные вещества оказывают выраженное вяжущее, противовоспалительное, антигеморрагическое действие, а также незначительное антимикробное, анальгезирующее и антидиарейное действие. В случае приема больших доз действуют антраценпроизводные, при этом увеличивается перистальтика и повышается тонус кишечника. Небольшие дозы ревеня стимулируют аппетит, нормализуют деятельность желудочно-кишечного тракта; средние дозировки обладают желчегонным действием; большие дозировки действуют как слабительное средство при атонии кишечника, запорах, для размягчения каловых масс при геморрое и трещинах прямой кишки. Препараты на основе корней ревеня применяются для лечения псориаза. Препараты ревеня лекарственного, обладающие слабительным эффектом, за рубежом представлены в форме таблеток, капсул и раствора для приема внутрь. Для получения оптимального фармакологического эффекта сырье ревеня сочетают с лекарственными растениями (подорожник, алоэ, сенна, фенхель), а также с курагой и черносливом. Для количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного была предложена методика спектрофотометрического определения в пересчете на катехин. Экспериментальным путем были подобраны оптимальные условия для экстракции дубильных веществ из сырья. Поскольку извлечение дубильных веществ проводится водой, то экстракция антраценпроизводных сводится к минимуму, поэтому данный способ извлечения в перспективе может быть использован как основа для получения лекарственных препаратов, обладающих вяжущим действием.
Таким образом, целью данного исследования является определение оптимальных условий экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного и разработка методики количественного анализа. Объектом исследования служили корни ревеня лекарственного. Электронные спектры измерялись на УФ-спектрофотометре UNICO 2800 (United Products and Instruments, США).
Собственные результаты исследования
Одной из доминирующих групп биологически активных соединений корней ревеня являются дубильные вещества, среди которых преобладают ратанин, катехин, глюкогаллин и галловая кислота [1, 3, 4]. С помощью спектрофотометра UNICO 2800 изучены электронные спектры водных извлечений из сырья. В качестве стандарта был использован катехин, дающий максимум поглощения при 282±2 нм (рис. 1), поскольку он является одним из доминирующих веществ корней ревеня лекарственного, а также достаточно распространен в других лекарственных растениях, что позволит унифицировать данную методику.
Извлечение дубильных веществ проводилось водой, поскольку дубильные вещества хорошо растворяются в воде, при этом другие фенольные соединения не будут переходить в раствор и мешать определению танинов. При разработке методики количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного выявлены оптимальные условия экстракции дубильных веществ: экстрагент — вода, соотношение сырья и экстрагента — 1:50, время экстракции — 15 мин на водяной бане (рис. 2).
![Рис. 2. График Каплана – Майера, отражающий процент- ную долю пациенток без рецидивов острого цистита в течение 6-месячного периода наблюдения (цит. по [27])](/upload/medialibrary/89a/69-4.png "Рис. 2. График Каплана – Майера, отражающий процент- ную долю пациенток без рецидивов острого цистита в течение 6-месячного периода наблюдения (цит. по [27])")
Методика определения
Пробу корней ревеня лекарственного размалывают до частиц, проходящих сквозь сито с отверстиями 1 мм. 1 г размельченного сырья засыпают в колбу объемом 250 мл, добавляют 50 мл воды. Колбу закрывают, взвешивают, присоединяют к обратному холодильнику и нагревают на водяной бане 15 мин с момента закипания экстрагента. После этого содержимое колбы охлаждают, взвешивают и при необходимости доводят до первоначальной массы водой. Полученный экстракт фильтруют (бумажный фильтр), удаляя первые 10 мл фильтрата (раствор А). 1 мл раствора А переносят в мерную колбу объемом 50 мл и доводят до метки дистиллированной водой. Оптическую плотность определяют спектрофотометром при 282 нм. Сумму дубильных веществ (Х) рассчитывают по формуле:
A × 50 ×50 ×100 /
X = E1% ×1×a×(100 - W)
1 см
где: A — оптическая плотность испытуемого где: A — оптическая плотность испытуемого раствора; E — удельный показатель поглощения стандартного образца катехина при 282 нм, равный 144; 50 — объем экстрагента, мл; 50 — объем испытуемого раствора, мл; 1 — объем аликвоты раствора А, мл; a — навеска сырья, г; W — влажность сырья, %.
Были получены следующие метрологические характеристики методики количественного определения дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного:
число степеней свободы (f) 10;
средние выборки (X_) 25,35;
стандартное отклонение (S) 0,60731;
доверительная вероятность (P, %) 95;
критерий Стьюдента (t (P,f)) 2,23;
полуширина доверительного интервала величины (ΔX) 1,3543;
относительная ошибка среднего результата (E, %) 5,8.
Итоговые данные статистической обработки исследований указывают на то, что ошибка единичного определения суммы дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного — ±5,80%.
Выводы
Разработана методика количественного анализа дубильных веществ в корнях ревеня лекарственного методом спектрофотометрии в пересчете на катехин. Содержание дубильных веществ в сырье ревеня лекарственного составляет 25,35%, что достигается подобранными оптимальными условиями экстракции дубильных веществ из корней ревеня лекарственного (экстрагент — вода, соотношение сырья и экстрагента —1:50, время экстракции — 15 мин на водяной бане). Данная методика позволяет получить высокое содержание дубильных веществ, проста и не требует использования реактивов, поэтому может быть использована для извлечения дубильных веществ из другого лекарственного растительного сырья в качестве основы для последующей разработки новых лекарственных препаратов, что призвано повысить доступность лечения для пациентов, страдающих заболеваниями пищеварительной системы.
2. Куркин В.А. Основы фитотерапии. Учебное пособие для студентов фармацевтических вузов. Самара: ООО «Офорт». ГОУ ВПО «СамГМУ Росздрава»; 2009. [Kurkin V.A. The basics of herbal medicine. Textbook for students of pharmaceutical universities. Samara: Ofort LLC GOU VPO SamGMU of Roszdrav; 2009 (in Russ.)].
3. Муравьева Д.А., Самылина И.А., Яковлев Г.П. Фармакогнозия. М.: Медицина; 2002. [Muravyova D.A., Samylina I.A., Yakovlev G.P. Pharmacognosy. M.: Medicine; 2002 (in Russ.)].
4. Государственная фармакопея Российской Федерации. XIV издание. Том II. М.: Медицина; 2018. [State Pharmacopoeia of the Russian Federation. XIV Edition. Volume II. M.: Medicine; 2018 (in Russ.)].
Контент доступен под лицензией Creative Commons «Attribution» («Атрибуция») 4.0 Всемирная.
